Pendahuluan: Antioksidan merupakan senyawa yang dapat mencegah terjadinya kerusakan oksidatif dan banyak didapatkan pada tanaman. Daun pulutan adalah salah satu tumbuhan yang berpotensi sebagai antioksidan. Fraksi n-hexane daun Pulutan diketahui memiliki senyawa aktif yang berpotensi sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis kandungan zat aktif dan aktivitas antioksidan pada fraksi n-hexane daun Pulutan. Metode: Studi observasi laboratorium analisis kandungan senyawa aktif dan aktivitas antioksidan yang terdapat pada fraksi n-hexane daun Pulutan. Identifikasi senyawa aktif dilakukan dengan menggunakan metode skrining fitokimia dan uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH (2,2-diphenyl- 1-picrylhydracyl radical) dengan beta karoten sebagai standar. Aktivitas antioksidan dievaluasi dengan melihat nilai IC50 yang dihitung dengan persamaan regresi linier. Hasil: Fraksi n-hexane daun Pulutan memiliki kandungan zat aktif alkaloid dan steroid. Fraksi n-hexane daun Pulutan memiliki aktivitas antioksidan (IC50 = 173.43) lebih lemah sepuluh kali lipat dibandingkan dengan beta karoten. Fraksi nhexane daun pulutan masuk dalam kategori antioksidan lemah sedangkan beta karoten sangat kuat. Kesimpulan: Fraksi n-hexane daun Pulutan memiliki aktivitas antioksidan lebih lemah dibandingkan dengan standar pembandingnya yaitu beta karoten.